胎牛血清（FBS）是細(xì)胞培養(yǎng)中常用的營養(yǎng)添加劑，其品質(zhì)與處理方式直接影響細(xì)胞生長狀態(tài)。正確的融化流程可避免血清中蛋白質(zhì)變性、降低沉淀風(fēng)險，并減少微生物污染機會。以下從溫度、時間、混勻、分裝與保存五個方面，總結(jié)實驗室常用且驗證有效的操作要點。

一、溫度控制：寧慢勿快

1.       預(yù)設(shè)解凍：實驗前一日傍晚將FBS從-20 °C移至4 °C冰箱，過夜（8-12 h）緩慢解凍，可最大限度減少脂質(zhì)與脂蛋白析出。

2.       水浴補足：次日將已半解凍的血清置于25 °C水浴，水位不超過瓶肩，輕輕晃動每2-3 min，縮短解凍時間；禁止37 °C長時間浸泡，防止生長因子活性下降。

3.       禁用熱沖擊：不可直接放入37 °C水浴或手握加熱，快速升溫會使球蛋白纖維析出，形成白色顆粒，影響后續(xù)細(xì)胞貼壁。

二、時間把握：2 h內(nèi)完成

整個融化過程建議≤2 h。超過4 h，血清中糖、氨基酸濃度梯度易誘發(fā)微生物繁殖；若臨時中斷，應(yīng)將瓶子重新放回4 °C并在6 h內(nèi)繼續(xù)處理。

三、混勻技巧：輕搖勿起泡

1.       倒置法：將瓶子輕輕顛倒5-6次，使上下液體均勻，避免劇烈搖晃產(chǎn)生氣泡；氣泡可增加蛋白質(zhì)氧化幾率。

2.       旋轉(zhuǎn)法：若瓶口已開啟，可用移液管緩慢吹打底層3-4次，忌用渦旋振蕩器。

四、分裝策略：一次用量，即刻封口

1.       預(yù)冷移液管：將50 mL移液管先置于4 °C，減少溫度差異引起的蛋白凝集。

2.       規(guī)格選擇：按日常接種量分裝（15 mL、30 mL、50 mL），每管留<10 %頂空，-20 °C豎直存放，避免反復(fù)凍融。

3.       標(biāo)識規(guī)范：寫明批號、日期、操作人，先進(jìn)先出，記錄可追溯到每批細(xì)胞。

五、保存與使用細(xì)節(jié)

1.       避光：棕色袋或鋁箔紙包裹，防止核黃素等光敏成分分解。

2.       溫度監(jiān)控：-20 °C普通冰箱保存≤6個月；-80 °C可延長至12個月，但需先分裝小體積，防止整瓶反復(fù)升溫。

3.       解凍即用：分裝后FBS融化后不再回凍，24 h內(nèi)用完；若剩余>2 mL，可暫放4 °C，48 h內(nèi)消耗完畢。

4.       無菌檢查：每批取50 μL涂布LB平板，37 °C過夜，確認(rèn)無雜菌生長后方可加入培養(yǎng)體系。

六、常見誤區(qū)與糾正

·         誤區(qū)1：室溫放置半天再補水浴
→ 糾正：室溫>6 h會顯著升高微生物風(fēng)險，應(yīng)4 °C過渡。

·         誤區(qū)2：融化后繼續(xù)水浴保溫
→ 糾正：長時間25 °C以上水浴易使熱敏感蛋白失活，應(yīng)立即分裝或冷藏。

·         誤區(qū)3：直接用原瓶反復(fù)倒取
→ 糾正：整瓶多次升溫-冷卻會造成批內(nèi)差異，應(yīng)先分裝再使用。

七、小結(jié)

遵循"4 °C預(yù)解凍-25 °C水浴補足-輕混勻-即時分裝-避光保存"五步流程，可保持胎牛血清的批間一致性，減少沉淀和污染，為細(xì)胞提供穩(wěn)定、營養(yǎng)豐富的生長環(huán)境。把細(xì)節(jié)做成習(xí)慣，實驗成功率自然水漲船高。祝您細(xì)胞狀態(tài)天天在線，實驗順利！