一、 復蘇
1. 把凍存管從液氮中取出來，立即投入37℃水浴鍋中，輕微搖動。液體都融化后（大概1-1.5分鐘），拿出來噴點酒精放到超凈工作臺里。
2. 把上述細胞懸液吸到裝10ml培養(yǎng)基的15ml的離心管中（用培養(yǎng)基把凍存管洗一遍，把粘在壁上的細胞都洗下來），1000轉離心5分鐘。
3. 把上清液倒掉，加1ml培養(yǎng)基把細胞懸浮起來。吸到裝有10ml培養(yǎng)基的10cm培養(yǎng)皿中前后左右輕輕搖動，使培養(yǎng)皿中的細胞均勻分布。
4. 標好細胞種類和日期、培養(yǎng)人名字等，放到CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，細胞貼壁后換培養(yǎng)基。
5. 3天換一次培養(yǎng)基。

二、 傳代
1. 培養(yǎng)皿中的細胞覆蓋率達到80%-90%時要傳代。
2. 把原有培養(yǎng)基吸掉。
3. 加適當?shù)囊鹊鞍酌福芨采w細胞就行），消化1-2分鐘。
4. 細胞都變圓后加如入等體積的含血清的培養(yǎng)基終止消化。
5. 用移液槍吹打細胞，把細胞都懸浮起來。
6. 把細胞吸到15ml的離心管中，1000轉離心5分鐘。
7. 倒掉上清液，加1-2ml培養(yǎng)基，把細胞都吹起來。
8. 根據(jù)細胞種類把細胞傳到幾個培養(yǎng)皿中。一般，癌細胞分5個，正常細胞傳3個。繼續(xù)培養(yǎng)。

三、 凍存
把細胞消化下來并離心（同上）。用配好的凍存液把細胞懸浮起來，分裝到滅菌的凍存管中，靜止幾分鐘，寫明細胞種類，凍存日期。4℃ 30min，-20℃ 30min，-80℃過夜，然后放到液氮灌中保存。
凍存液的配制： 70%的*培養(yǎng)基+20%FBS+10%DMSO. DMSO要慢慢滴加，邊滴邊搖。

要注意的就是無菌操作！

科研實驗中，細胞的體外培養(yǎng)一直是一個重要環(huán)節(jié)。細胞要養(yǎng)好，就要用好血清，如Ausbian®特級胎牛血清，它適合各種細胞培養(yǎng)，尤其適合難養(yǎng)細胞，如：干細胞、肝細胞，神經(jīng)細胞，原代培養(yǎng)、細胞融合、轉染細胞等。

Ausbian®特級胎牛血清所有血清出廠前，均經(jīng)過嚴格質控，每個批次附有詳細完整的《檢測報告》，包括：品名，貨號，批號，血源地，生產日期，保質期，pH值、滲透壓、血紅蛋白、總蛋白、球蛋白、IgG、內毒素、無菌檢查（細菌、真菌、支原體）、病毒檢查（如BVD、牛腺病毒、細胞病變效應等）、促細胞生長能力、細胞毒性、BVD-1/2抗體檢查等。

實驗人對于新批次血清，應認真審閱《檢測報告》，做好試用前篩選第一步。（如何看懂《檢測報告》，可登陸“締一生物"網(wǎng)站，留言技術部，得到免費幫助。）

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