如何從細(xì)胞核中移除不必要的細(xì)胞組分

更新時(shí)間：2020-12-22 | 點(diǎn)擊率：992

一項(xiàng)刊登在雜志Nature上的研究報(bào)告中，來自歐洲分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室等機(jī)構(gòu)的科學(xué)家們通過研究揭示了如何從細(xì)胞核中移除不想要的組分。將細(xì)胞組裝成為特殊的區(qū)室/隔間對(duì)于細(xì)胞的功能而言至關(guān)重要，比如，通過將細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)分離，核被膜就能防止對(duì)不成熟的RNAs進(jìn)行過早地翻譯。

然而，在有絲分裂期間，核被膜會(huì)發(fā)生分解從而允許諸如核糖體等大型細(xì)胞質(zhì)組分與核物質(zhì)混合，當(dāng)核被膜在有絲分裂后重新組裝時(shí)，這些細(xì)胞質(zhì)組分會(huì)被再次移除，而核被膜會(huì)通過主動(dòng)輸入或輸出一定尺寸大小的底物來促進(jìn)這一過程的發(fā)生，但目前研究人員并不清楚這對(duì)于大型的細(xì)胞質(zhì)組分會(huì)發(fā)生什么。

如今研究人員發(fā)現(xiàn)，實(shí)際上，諸如核糖體等大型的細(xì)胞質(zhì)組分在核被膜再次組裝之前就會(huì)被從形成的細(xì)胞核中移除，而這種排出過程需要名為Ki-67的蛋白質(zhì)的幫助；在此前研究中，研究者發(fā)現(xiàn)，蛋白質(zhì)Ki-67在有絲分裂早期戒斷扮演著表面活性劑的角色，其主要負(fù)責(zé)保持染色體的分離狀態(tài)，值得注意的是，如今研究者發(fā)現(xiàn)，這會(huì)改變其在有絲分裂結(jié)束時(shí)的特性，并且會(huì)發(fā)揮相反的功能，即染色體的聚集，通過在細(xì)胞分裂結(jié)束時(shí)聚集形成一個(gè)密集的簇狀結(jié)構(gòu)，染色體就能在核被膜重組前將大型的細(xì)胞質(zhì)組分排出。

后研究者表示，本文研究揭示了一種單一蛋白如何明顯改變?nèi)旧w的表面特性的，后這或許會(huì)促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)關(guān)鍵過程的有效劃分。

在培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)，人們常常關(guān)注細(xì)菌和真菌的污染，認(rèn)為它們是細(xì)胞培養(yǎng)的主要干擾因素。但其實(shí)，更嚴(yán)重的是支原體的感染，它的發(fā)生率非常高，而且不易被發(fā)現(xiàn)。不僅普通光鏡下無法發(fā)現(xiàn)支原體，而且培養(yǎng)基也不容易變色。只有在污染的后期培養(yǎng)基才容易變黃。下圖為支原體嚴(yán)重污染后的表現(xiàn)：

那么，支原體污染為什么發(fā)生率這么高？

細(xì)胞培養(yǎng)中有幾種支原體污染與人、牛和豬有關(guān)。實(shí)驗(yàn)室的工作人員是口腔支原體、發(fā)酵支原體和人型支原體的主要來源。這三種支原體占細(xì)胞培養(yǎng)中支原體污染的一半以上，它們主要存在于人的口咽部。支原體也存在于人的頭發(fā)、皮膚上。胰酶如果是豬來源的，那么也可能存在豬鼻支原體。以下為支原體污染的主要途徑。

因此，對(duì)于實(shí)驗(yàn)室所培養(yǎng)的細(xì)胞，應(yīng)進(jìn)行支原體的定期監(jiān)測(cè)。德國(guó)MB公司『支原體常規(guī)PCR檢測(cè)試劑盒』(如Venor® Gem OneStep試劑盒)是常用的支原體篩查用試劑盒，可用于細(xì)胞培養(yǎng)中是否存在支原體污染的篩查。

它具有以下的特點(diǎn)：

①高特異性，270bp左右的一條陽(yáng)性對(duì)照條帶，涵蓋了所有可能感染細(xì)胞的支原體物種，操作簡(jiǎn)單，結(jié)果易于觀察。（根據(jù)16s rRNA序列的同源性比對(duì)，該試劑盒可檢測(cè)出1種脲原體、7種無膽甾原體和85種支原體。）

②高靈敏度。

③試劑盒含內(nèi)控對(duì)照，可防止假陰性的發(fā)生。

(2)操作步驟

下列圖示以Venor® Gem OneStep支原體常規(guī)PCR檢測(cè)試劑盒(一步法)( 貨號(hào)：11-8050) 為例，具體產(chǎn)品操作以說明書為準(zhǔn)。

第1步：樣本處理

第2步：試劑制備

第3步：PCR體系建立

第4步：?jiǎn)?dòng)PCR反應(yīng)

第5步：電泳結(jié)果分析