1.細(xì)胞在體外培養(yǎng)時應(yīng)該貼壁嗎？

　　答：大部分來自實(shí)體組織器官的細(xì)胞會貼壁。它們在機(jī)體內(nèi)時，也是與其他細(xì)胞或者細(xì)胞外基質(zhì)結(jié)合的。一般一種細(xì)胞具有一種特定的功能，不同種細(xì)胞有機(jī)組合在一起，就能構(gòu)成協(xié)同完成某些功能的器官¹。

　　2. 細(xì)胞貼壁的原理是什么？

　　答：貼壁的過程可能是這樣的：細(xì)胞首先分泌細(xì)胞外基質(zhì)，這種細(xì)胞外基質(zhì)黏附在支持物的表面（如培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿的底面）。細(xì)胞通過其表面的黏附因子與這些細(xì)胞外基質(zhì)結(jié)合。所以細(xì)胞貼壁與否與細(xì)胞本身分泌細(xì)胞外基質(zhì)的能力以及細(xì)胞本身表達(dá)的黏附分子的數(shù)量有關(guān)，也與培養(yǎng)皿壁的表面結(jié)構(gòu)有關(guān)¹。培養(yǎng)基中的黏附蛋白也會摻入到細(xì)胞外基質(zhì)中。

　　例如，曾有人用胎牛血清培養(yǎng)大鼠腎臟細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)大鼠腎臟細(xì)胞形成的外基質(zhì)層中，除了有腎臟細(xì)胞自身合成的纖黏連蛋白外，也含有胎牛血清中的纖黏連蛋白²。

　　又有人培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCs），發(fā)現(xiàn)鈷⁶⁰照射過的塑料培養(yǎng)瓶（照射劑量6Gy）能促進(jìn)貼壁，其效果和IV型膠原包被的培養(yǎng)瓶相同。這可能與射線改變了培養(yǎng)瓶壁的表面結(jié)構(gòu)有關(guān)³。

　　圖　細(xì)胞貼壁的鏡下照片

　　3. 貼壁有什么好處嗎？

　　答：貼壁對維持細(xì)胞的良好形態(tài)和促進(jìn)細(xì)胞的增殖有益處。有人培養(yǎng)許旺細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)貼壁良好的細(xì)胞，其增殖率也較高⁴。人的造血干細(xì)胞培養(yǎng)，更是需要有貼壁細(xì)胞構(gòu)成“造血微環(huán)境”。有人發(fā)現(xiàn)這些貼壁細(xì)胞包括成纖維細(xì)胞，巨噬細(xì)胞，上皮樣細(xì)胞，脂肪細(xì)胞，它們交錯連接，構(gòu)成網(wǎng)狀支架結(jié)構(gòu)^5，6。

　　4. 對于某些懸浮細(xì)胞,能促進(jìn)它貼壁嗎？

　　答：有人介紹過一種使懸浮的肝癌細(xì)胞貼壁的方法，即采用多聚賴氨酸浸泡過的蓋玻片，放置到培養(yǎng)瓶中，可使懸浮的肝癌細(xì)胞貼壁⁷。包被過其他細(xì)胞外基質(zhì)的載體表面，也可促進(jìn)細(xì)胞黏附。

　　5、不同細(xì)胞外基質(zhì)對細(xì)胞粘附的效果一樣嗎？

　　答：不會*一樣。具體看是哪種細(xì)胞。軟骨細(xì)胞對II型膠原的黏附性較好；上皮細(xì)胞在Ⅳ型膠原底物上貼壁良好，而在I、II、III型膠原底物的培養(yǎng)板上貼壁情況較差。纖黏連蛋白能夠加速成纖維細(xì)胞貼壁，但對表皮細(xì)胞、晶狀體上皮細(xì)胞和乳腺上皮細(xì)胞貼壁則無此作用⁴。

　　圖 細(xì)胞外基質(zhì)

　　6、牛血清對細(xì)胞粘附有作用嗎？

　　答：有。牛血清中含有玻連蛋白、纖黏連蛋白，對細(xì)胞粘附都有促進(jìn)作用⁸。需注意，熱滅活小牛血清會降低血清對細(xì)胞粘附的促進(jìn)作用，尤其在細(xì)胞旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)時更為明顯⁹。

　　參考文獻(xiàn)

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　　2. Hayman EG, Ruoslahti E. Distribution of fetal bovine serum fibronectin and endogenous rat cell fibronectin inextracellular matrix. J Cell Biol. 1979 Oct;83（1）：255-9.

　　3. 吳建波，尹麗慧，等。 不同培養(yǎng)方法對骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞貼壁　和純度的影響。 山東醫(yī)藥，2008,48（40）：15-17

　　4. 韓巖，等。 基膜黏連蛋白和Ⅳ型膠原對培養(yǎng)許旺細(xì)胞貼壁及增殖的作用。 中華顯微外科雜志。 2002 , 25 （3） :194-196

　　5. 朱壬葆， 等。 人骨髓體外培養(yǎng)中貼壁細(xì)胞層的形態(tài)分析。 實(shí)驗(yàn)生物學(xué)報。 1982 （2） :33-43

　　6. 季紅，劉永，趙林普。 小鼠骨髓細(xì)胞體外培養(yǎng)中貼壁細(xì)胞層的結(jié)構(gòu)與作用。中國病理生理雜志， 1988 （01）

　　7. 陳桑，劉希鳳，凌茂英。 介紹一種使懸浮的肝癌細(xì)胞貼壁的方法。 大連醫(yī)科大學(xué)學(xué)報， 1992 （4） :61-62

　　8. Edward G.Hayman,et al.Vitronectin—A major cell attachment-promoting protein in fetal bovine serum.Experimental Cell Research. 1985,160（ 2）： 245-258

　　9. Donald J. Giard. Routine heat inactivation of serum reduces its capacity to promote cell attachment. In Vitro Cellular & Developmental Biology.1987, 23（ 10）： 691–697